طريقة التضخيم:
مضان متساوي الحرارة PCR: في مضان متساوي الحرارة PCR، يحدث تضخيم الحمض النووي عند درجة حرارة ثابتة. وهذا يعني أن التفاعل يحدث عند درجة حرارة واحدة ثابتة طوال العملية برمتها.
تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي: يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، والمعروف أيضًا باسم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)، عملية التدوير الحراري. أنها تنطوي على دورات درجة حرارة متعددة، بما في ذلك خطوات تمسخ، التلدين، والتمديد. عادةً ما يتم التحكم في دورات درجة الحرارة هذه بواسطة آلة دورة حرارية.
التحكم في درجة الحرارة:
مضان متساوي الحرارة PCR: كما يوحي الاسم، يحافظ مضان متساوي الحرارة PCR على درجة حرارة ثابتة أثناء التفاعل، عادة حوالي 60-65 درجة مئوية. وهذا يبسط المعدات اللازمة للتفاعل بالمقارنة مع PCR في الوقت الحقيقي.
تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي: يتضمن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي التدوير الحراري، حيث يتم تغيير درجة الحرارة بشكل متكرر بين مستويات مختلفة (على سبيل المثال، تمسخ الطبيعة عند حوالي 95 درجة مئوية، والتليين عند حوالي 55-65 درجة مئوية، والتمديد عند حوالي 72 درجة مئوية). وهذا يتطلب دورة حرارية مع التحكم الدقيق في درجة الحرارة.
طريقة الكشف:
مضان متساوي الحرارة PCR: يتم استخدام الكشف عن الإسفار في كل من مضان متساوي الحرارة PCR و PCR في الوقت الحقيقي. ومع ذلك، في PCR الأسفار متساوي الحرارة، عادةً ما يتم الكشف عن إشارات الأسفار بشكل مستمر دون الحاجة إلى ركوب الدراجات بين خطوات درجات الحرارة المختلفة.
تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي: في تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، يتم قياس إشارات التألق بعد كل دورة تغير في درجة الحرارة (عادةً بعد خطوة التلدين/التمديد). وهذا يسمح بمراقبة تضخيم الحمض النووي في الوقت الحقيقي أثناء حدوثه أثناء عملية التدوير الحراري.
التطبيقات:
الفلورسنت متساوي الحرارة PCR: هذه التقنية مناسبة لتطبيقات معينة، مثل اختبار نقطة الرعاية السريعة، حيث تكون البساطة والسرعة ضروريتين. يمكن استخدامه للكشف النوعي عن تسلسلات الحمض النووي المحددة.
تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي: يُستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي على نطاق واسع في التحليل النوعي والكمي للحمض النووي. إنها حساسة للغاية وتسمح بقياس الكمية الأولية من الحمض النووي في العينة، مما يجعلها مفيدة لتطبيقات مثل تحليل التعبير الجيني، وتقدير الحمل الفيروسي، والتنميط الجيني.
باختصار، الفرق الرئيسي بين مضان متساوي الحرارة PCR وPCR في الوقت الحقيقي هو التحكم في درجة الحرارة وطريقة التضخيم. يحافظ PCR متساوي الحرارة على درجة حرارة ثابتة طوال التفاعل وهو مناسب للتطبيقات الأبسط والسريعة، في حين يتضمن PCR في الوقت الحقيقي التدوير الحراري ويستخدم لمجموعة واسعة من تطبيقات تحليل الحمض النووي الكمي والنوعي.