الكواشف الشائعة في ثقافة الخلية
عندما تغادر الخلايا أو الأنسجة الحيوانية الجسم لتتم زراعتها خارج الجسم ، فمن الضروري تزويدها بالعديد من العناصر الغذائية اللازمة للنمو والكواشف المختلفة اللازمة لنمو الخلايا بشكل أفضل في المختبر. في هذا العدد ، سأقدم بإيجاز بعض مكونات الكاشف المستخدمة في عملية زراعة الخلايا ووظائفها.
1. تكوين الخلية المتوسطة الثقافة
(1). وسط الثقافة الأساسية
تشمل الوسائط القاعدية الشائعة بشكل أساسي MEM و DMEM و RPMI ، والتي توفر بشكل أساسي أنظمة عازلة بما في ذلك الجلوكوز والأحماض الأمينية والماء والعناصر النزرة وبيكربونات الصوديوم.
● الجلوتامين
وهو حمض أميني أساسي ضروري لنمو الخلايا ويشارك في تخليق البروتين واستقلاب الحمض النووي.
● مؤشر الفينول الأحمر
مؤشر حمضي شائع الاستخدام ، يظهر اللون الأصفر عندما يكون حامضيًا ، والأحمر عندما يكون محايدًا ، والأرجواني عندما يكون قلويًا. يستخدم الفينول الأحمر كمؤشر لقيمة الأس الهيدروجيني في الوسط.
● نظام عازلة كربونات / PH
نظام عازل فسيولوجي لدرجة الحموضة. بسبب إنتاج الحمض أثناء استقلاب الخلية ، سيتم استهلاك HCO3- الموجود في الوسط تدريجيًا ، لذلك يحتاج ثاني أكسيد الكربون إلى التجديد في الوقت المناسب للحفاظ على الرقم الهيدروجيني ضمن نطاق معين.
(2). مصل الحيوان
أضف 2٪ -20٪ مصل إلى الوسط القاعدي لتشكيل وسط كامل. لا يستطيع المصل تزويد الخلايا بالعناصر الغذائية الأساسية اللازمة للنمو فحسب ، بل يحتوي أيضًا على مكونات مهمة تشارك في عملية التمثيل الغذائي للخلايا مثل عوامل النمو والهرمونات والعناصر النزرة والأيونات.
(3). مضادات حيوية
من أجل منع تلوث الخلايا أثناء عملية الاستنبات ، يضاف خليط البنسلين والستربتومايسين إلى الوسط الكامل ، أي جسم مضاد مزدوج. البنسلين فعال بشكل أساسي ضد البكتيريا موجبة الجرام ، والستربتومايسين فعال ضد العديد من البكتيريا سالبة الجرام. .
2. التربسين- EDTA
يمكن أن يقوم التربسين بتحليل البروتين بين الخلايا ثم فصل الخلايا. EDTA هو عامل مخلب كيميائي ذو سمية منخفضة وله تأثير منفصل على الخلايا الملتصقة. عندما يتم استخدام الاثنين معًا ، تكون كفاءة تشتيت الخلايا أعلى. هذه الخطوة تسمى الخلايا الهضمية. بالنسبة للخلايا المختلفة ، هناك متطلبات مختلفة لدرجة الحرارة والوقت وتركيز التربسين عند استخدامه. إذا كان الهضم غير كافٍ ، فلا يمكن هضم الخلايا ، وسوف يتسبب الهضم المفرط في تلف الخلايا. نظرًا لأن المصل في الوسط يمكن أن يقلل من نشاط التربسين ، فعادة ما يتم استخدام الوسط الكامل لإنهاء هضم الخلايا.
3. PBS العازلة
PBS هو محلول ملحي مخزّن بالفوسفات مع توازن الملح وتأثير التخزين المؤقت القابل للتعديل لدرجة الحموضة. يستخدم بشكل عام لغسل الخلايا والحفاظ على الضغط التناضحي الخلوي.
4 - ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)
واقي خلوي مهم ومكون مهم في سائل الحفظ بالتبريد الخلوي. أثناء عملية الحفظ بالتبريد للخلايا ، يمكن لـ DMSO اختراق غشاء الخلية بسرعة ودخول الخلية ، وخفض نقطة التجمد ، وتأخير عملية التجميد ، وزيادة تركيز الأيونات في الخلية ، وتقليل تكوين بلورات الجليد في الخلية ، وتقليل الخلية ضرر.
5. مثبطات الميكوبلازما
يعد تلوث الميكوبلازما مصدرًا شائعًا للتلوث في عملية زراعة الخلايا. ومع ذلك ، يمكن استخدام مثبطات الميكوبلازما للقضاء على الميكوبلازما في سائل الخلية في المرحلة الأولى من التلوث ، بحيث يمكن أن تستمر التجربة.
6. صبغة التريبان الزرقاء
كاشف تلطيخ بيولوجي يستخدم عادة للكشف عن سلامة غشاء الخلية. بسبب فقدان سلامة غشاء الخلية وزيادة النفاذية ، يمكن تلطيخ الخلايا الميتة باللون الأزرق عن طريق أزرق التريبان ، في حين أن الخلايا الحية لن تكون ملطخة لأنها تحتوي على أغشية خلوية سليمة يمكن أن تمنع أزرق التريبان من دخول الخلية. يمكن تمييز الخلايا الحية والميتة عن طريق لون الخلية تحت المجهر ، وهو مناسب لحساب الخلايا الحية.
